Enciclopedia de Nutracéuticos

Una muestra de 20g seca y pulverizada se disuelve con 100 mL de agua. Una alícuota de 5 mL es pipeteada en un tubo de vidrio de 25 mL con tapa. Si la muestra contiene almidón se agrega 10mg de pectinasa Takadias-dise he incubada por 30 min a 40 °C. Se agregan 2 g de hidróxido de potasio en pellet con vortex. Después se agregan 10 mL de metanol en el tubo y calentado en baño de agua en calentador rotativo a 80 °C por 1 hora. (4)

Después de la hidrolisis los tubos se enfrían a temperatura ambiente y el contenido transferido a un frasco volumétrico con 15 mL de agua. Después se añaden 3 mL de volumen a concentración de 37% de HCl. El volumen fue llevado a 50 mL con agua, mezclado y filtrado. Una porción de 25 mL es filtrada y pipeteada en un vaso de 50 mL y el pH es ajustado a 9.8 con una solución NaOH 1 M. Esta solución es aforada a 50 mL con agua. Una alícuota de la solución (5 mL) son trasferidos a un tubo de pruebas y 0.5 mL de solución de fosfatasa a 200UI/mL y encubada a 37°C por 1 hora. (4)

A un cartucho llenado con resina de intercambio anicónico es pipeteada una muestra de la solución hidrolizada (2 mL) y eluida con una solución NaOH 0.1M. El eluido es colectado y filtrado con una membrana de 0.45 µm e inyectada en cromatografía iónica. (4)Se usa una columna de intercambio aniónico de 250x4 mm con una fase móvil isocratica de NaOH 1.0M a temperatura ambiente con un flujo 0.4 mL/min con las condiciones de PAD: (4)

 

Tiempo (min)           Voltaje (V)

0.00                           0.05

0.20                           0.05

0.40                           0.05

0.41                           0.70

0.60                           0.70

0.61                          -0.10

1.00                          -0.10