Enciclopedia de Nutracéuticos

Análisis químico del compuesto

 

 

1. Preparación de yema de huevo: Huevos se calientan en baño maría por 15 minutos, se separa la yema de huevo de la clara. Las yemas combinadas se almacenan a 5°C.

 

2. Extracción de lecitina: extracción de lecitina de yema de huevo no aceitada, se agrega etanol al 100% a 5 g de yema de huevo calentada o no calentada a un radio final de 5:1. La mezcla se centrifuga 400 xg por 5 minutos. El sobrenadante se transfiere a a frasco y se remueve el etanol por evaporación rotatoria. La fracción seca se pasó a vial de 15 mL con 10 mL de cloroformo/metanol (2:1, vol/vol) para análisis HPLC. El precipitado se seca a T ambiente por 2 días y se elimina el aceite usando el método AOCS, etanol acuoso 91% se usa en radio 5:1 para extraer fosfolípidos. 40 mL de cloroformo/metanol (2:1 vol/vol) se usa para extraer lípidos de las yemas. Se usa agua saturada butanol para extraer lípidos polares del residuo de yemas. Lípidos combinados se lavan con método Folch.

 

3. Cuantificación de fosfolípidos por HPLC: Columna LC-600 con columna sílica y CR501 integrador cromatópaco. Se usa elución cloroformo/metanol/agua/ácido acético (63.5:32:4:0.5 vol) a rlujo 0.5 mL/min, se uso nitrógeno a un flujo 2.3 L/min para evaporar el solvente, se usaron curvas esstándares para cuantificación fosfolípidos.

 

4. Cuantificación de colesterol por cromatografía de gas: 100 mg de lípidos se transfieren a vial de vidrio, se agrega 2 mL KOH 1 N a la muestra y se da la reacción de saponificación, se agrega 5 mL se agua destilada y tres porciones de 5 mL de eter dietil para extraer los materiales no saponificados. Se lava el extracto de eter con agua destilada y evaporado con nitrógeno. Materia no saponificada se disuelve en 1 mL de hexano con colesterol como estándar interno y las muestras duplicadas se inyectan a columna capilar sílica de una cromatógrafo de gas Hewlett-Packard 5890 Series II, la temperatura del cromatógrafo 285!C y la de inyección y detector 300°C.